產(chǎn)品名稱： Stemcell  Lymphoprep 淋巴細(xì)胞分離液

產(chǎn)品貨號(hào):  07851

產(chǎn)品規(guī)格：500 ml

產(chǎn)品品牌：Stemcell

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Lymphoprep是一種無(wú)菌、內(nèi)毒素含量低的即用型分離液，是目前國(guó)內(nèi)外分離正常人或病人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC:Mononuclear cells of Peripheral blood)(包括單核細(xì)胞monocytes和淋巴細(xì)胞lymphocytes)的常用方法，具有與昂貴的GE公司的PLUS或PREMIUM分離液同樣的指標(biāo)。

產(chǎn)品應(yīng)用

人外周血、骨髓和臍帶血淋巴細(xì)胞分離

骨髓、胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離

產(chǎn)品參數(shù)：

成分：泛影葡胺鈉(Sodium diatrizoate)：9.1% (w/v)；多糖：5.7% (w/v)

密度：1.077±0.001g/ml

滲透性：290±15mOsm

內(nèi)毒素含量：<1.0EU/ml

分離所得PBMC中紅細(xì)胞的含量：整個(gè)細(xì)胞數(shù)目的3-10%。

產(chǎn)品原理

PBMC與血液中的其他成分存在密度差異，利用密度在1.077±0.001g/ml之間而且近于等滲的LymphoprepTM溶液作密度梯度離心時(shí)，紅細(xì)胞和粒細(xì)胞由于密度大，故沉于分離液底部。PBMC密度稍低于分離液，故位于分離液界面上，獲得PBMC。LymphoprepTM分離液含有多糖（polysacccharide）,多糖能粘附在細(xì)胞表面，使紅細(xì)胞和粒細(xì)胞聚集下沉，但它對(duì)淋巴細(xì)胞的活性和紅細(xì)胞和粒細(xì)胞進(jìn)一步分離有負(fù)面影響。

注意事項(xiàng)：

該分離液僅適用于人體的外周血液，不適用于動(dòng)物。

使用該分離液時(shí)，需將待分離的血液用生理鹽水做等體積的稀釋。

分離液的保存應(yīng)置于無(wú)菌環(huán)境，并避光保存。

詳細(xì)操作步驟見產(chǎn)品說明書。

操作步驟（僅供參考）

第一步、

在含有抗凝劑（EDTA、heparin、或ACD）的管子內(nèi)收集血液，或者用去纖維蛋白的血液。此處抗凝劑的選擇取決于得到淋巴細(xì)胞以后，后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求，一般選取EDTA即可。

第二步、

用等體積的0.9%的NaCl溶液（即生理鹽水）稀釋血液。

第三步、

在12-15ml的離心管內(nèi)，將6ml稀釋后的血液鋪在3ml分離介質(zhì)Lymphoprep上。

此處鋪層可以采用從上面鋪，或從下面鋪兩種方法。鋪層的關(guān)鍵是不能讓血液和分離液混在一起，要界面分層清晰。

第四步、

在室溫下——20攝氏度左右，用水平轉(zhuǎn)子，800g的離心力，離心20分鐘。（如果血液存放時(shí)間超過2小時(shí)——從人體抽出算起，離心時(shí)間延長(zhǎng)為30分鐘）。

第五步、

離心后，離心管內(nèi)位于血液和分離液界面處的明顯的一層即為淋巴細(xì)胞層。

用移液管直接吸取淋巴細(xì)胞層，注意，不要去除上面的血液層，而是直接吸取。移至另一離心管中。

第六步、

用大約2倍體積的0.9%的NaCl溶液（生理鹽水）稀釋收集到的淋巴細(xì)胞，在250g-300g的離心力下，離心10分鐘，（此處在加上稀釋液后的體積在15ml離心管內(nèi)不宜超過5-6ml，體積過大，會(huì)降低淋巴細(xì)胞的產(chǎn)率），收集沉淀，即得到所需的人外周血單個(gè)核細(xì)胞，即可用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品名稱： Stemcell  Lymphoprep 淋巴細(xì)胞分離液

產(chǎn)品貨號(hào):  07851

相關(guān)定義：

Ficoll密度梯度離心

常用來分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的分層液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分層液。Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，平均分子量為400,000，當(dāng)密度為1.2g／ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞，就可從外周血中分離到單個(gè)核細(xì)胞。

單個(gè)核細(xì)胞

外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。

這是一個(gè)含義不明確的術(shù)語(yǔ)，常用于指組織切片或血液白細(xì)胞組分中的單個(gè)核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)或淋巴細(xì)胞或兩者的混合物，是相對(duì)于多形核細(xì)胞而言的。

血細(xì)胞和密度

利用細(xì)胞的比重不同，可把血細(xì)胞分成不同的比重層次，外周血中紅細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞比重較大，為1.092左右，而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞比重較小，為1.075～1.090。配制比重介于1.075～1.090之間的等滲液，通常用聚蔗糖(商品名Ficoll)與泛影葡胺，用此比重的等滲液作密度梯度離心，使比重大于此比重的紅細(xì)胞、多形核粒細(xì)胞沉于管底，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浮于分層液與血液界面上，可用吸管吸出。這種方法分離出的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞稱為單個(gè)核細(xì)胞。在干細(xì)胞采聚過程中，外周血或骨髓中的造血干細(xì)胞比重亦與淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞相同。因而，分離的單個(gè)核細(xì)胞中含有造血干細(xì)胞。

血液中的細(xì)胞成分。根據(jù)細(xì)胞質(zhì)中有無(wú)血紅蛋白，血細(xì)胞被分為紅細(xì)胞和白細(xì)胞。白細(xì)胞根據(jù)其胞質(zhì)中有無(wú)顆粒又分為有粒白細(xì)胞和無(wú)粒白細(xì)胞。有粒白細(xì)胞又根據(jù)其顆粒的染色特性分為嗜酸粒細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。無(wú)粒白細(xì)胞又根據(jù)其大小、核質(zhì)比例和染色性質(zhì)分為單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。